产品货号:
QN0880
中文名称:
PAGE凝胶银染试剂盒
英文名称:
PAGE Gel Silver Staining Kit
产品规格:
1L
发货周期:
1~3天
产品价格:
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蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团(如巯基、羰基等)与银的结合,然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒,可把蛋白电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比考马斯亮蓝高,该产品整个过程操作简单,灵敏度高,能检测到10ng以下的蛋白条带。
组分 | 规格 |
染色液A | 200mL |
染色液B | 1mL |
染色液C | 100mL |
显色液D | 100mL |
试剂E | 2g |
保存:室温,有效期1年。
1L规格指可配制的银染液的体积,实际使用次数根据PAGE胶大小不同而不同。
- 银染主要出现在PAGE胶的表面,使用薄胶(0.5~0.75mm)可以提高灵敏度。
- 对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,可用甲醇将胶漂洗后,继续进行银染。考染过程中的乙酸会干扰银染,因此要确保将PAGE凝胶中残留的乙酸彻底洗净。
- 不同蛋白质对银染的反应是不一样的,尤其是碱性蛋白染色效果差。因此,不宜用银染测定不同蛋白的比例。
- 染色过程中,缓慢的振荡是必要的,一般选择40~60rpm。
- 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致,所以全程中都应带手套操作。
- PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的,所以溶液的配制应使用电导率小于1μS的去离子水。
- 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面,可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底,或是染色过程时温度太低。
- 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
- PAGE胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些物质会干扰银染。
- 室温操作时,温度的波动往往会干扰银染的效果,恒温水浴可以解决这个问题。
- 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
- 染色使用的玻璃器皿必须非常干净,用酸浸泡可以满足要求。
- 银染应尽快照相,随着时间延长,蛋白条带会变浅,而背景会加深。
- 银染容器最理想的是玻璃平皿,其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。
- 试剂如有沉淀析出,混匀溶解(可加热)后室温使用。
一、染色液配制
需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定,一般的mini-PAGE胶需要20~30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗,染色液须用去离子水配制,现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL,可以按比例改变各成分用量。
- 固定液:取40mL无水乙醇,10mL染色液A加去离子水至100mL,混匀。
- 敏化液:取30mL无水乙醇,10mL染色液C加去离子水至100mL,混匀。
- 银染液:称取0.12g试剂E,用50mL去离子水溶解,加入10μL染色液B混匀,加去离子水至100mL现用现配。
- 显色液:10mL显色液D和30μL染色液B加入去离子水至100mL,混匀,现用现配。
- 终止液:取5mL染色液A加去离子水稀释至100mL,现用现配。
二、染色
- PAGE电泳结束后,将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中,用固定液固定30min。
- 将PAGE胶转移至敏化液中,使染液没过PAGE胶,室温作用30min。可置于摇床上缓慢摇晃。
- 弃去敏化液,用去离子水漂洗三次,每次10min。
- 将PAGE胶转移至银染液中,使染液没过PAGE胶,室温摇晃40min。
- 将PAGE胶转移至显色液中,使显色液没过PAGE胶,室温摇晃,该显色一般在10min左右。
- 再选择合适的时间进行终止,弃去显色液,加入终止液即可。最后可进行信号收集保存。
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